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鱟試劑-廈門鱟試劑生物科技股份有限公司官網(wǎng)

學術分享丨淺談內毒素檢測的干擾及干擾去除方法

發(fā)布時間:2023-02-14
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細菌內毒素檢查法(BET)是利用鱟試劑來檢測供試品中細菌內毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法,擁有操作簡單、靈敏度高、專屬性強、試驗結果易判斷等優(yōu)點, 因而被廣泛應用于藥品、醫(yī)療器械、臨床醫(yī)學研究,各種水源、食品、動物飼料等方面的體外內毒素檢查。BET的反應機理是一系列的酶促反應,任何影響反應機制因素的干擾,都會導致檢查結果的異常。特別是近些年生物醫(yī)藥的樣本組分越發(fā)復雜,對去除內毒素檢測干擾提出更大的挑戰(zhàn)。

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廈門鱟生科·BIOENDO給大家整理了以下檢測樣本時可能產(chǎn)生干擾的因素都有哪些:

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環(huán)境內毒素無處不在,操作環(huán)境及操作不當可使在操作過程中帶來污染,所用器具處理不當,被外來的內毒素污染,都很容易導致假陽性結果。因此BET應在符合規(guī)定的凈化間或操作臺進行,盡量防止外源性內毒素的污染。所用器材應清洗干凈,用酸、堿洗液或洗滌劑清洗后, 應反復沖洗干凈,避免殘留的內毒素。如玻璃容器須在250℃干熱滅活至少30min。采樣用注射器及吸管應有良好的精密度,玻璃容器材質應選用耐酸、堿的硬質玻璃,膠管、膠塞應使用優(yōu)質醫(yī)用產(chǎn)品。實驗所接觸的器皿耗材均要無內毒素,以避免外源引入污染。操作人員在試驗過程中勿大聲講話和急速行動,防止塵埃和唾液濺入檢品中。

供試品的種類不同,對于BET的干擾因素不同,下面列舉了幾種常見的干擾因素及其解決方式。

二價陽離子:二價陽離子濃度不足(如Mg2+離子),內毒素無法激活鱟試劑中的酶,反應被抑制??赏ㄟ^使用鈣鎂離子添加劑(BY01)解決,注意過高的二價陽離子(如Ca2+)濃度可能會對試驗帶來抑制作用。

高滲透壓:較高濃度的糖或鹽通常會抑制BET,可使用BET水在允許范圍內進行稀釋消除干擾。

酶、酶抑制劑:供試品若含有絲氨酸蛋白酶會增強反應,若含有絲氨酸蛋白酶抑制劑會抑制反應。通常的消除干擾的方式為:使用BET水或廠家提供的樣本處理液(ST09)稀釋10倍,然后75℃加熱10分鐘,冷卻至室溫后再檢測。

非內毒素反應物:β-葡聚糖會造成實驗結果假陽性,可使用G因子抑制劑(BT02)消除干擾?;蚴褂?/span>內毒素檢測試驗進行檢測。

洗滌劑:高濃度的洗滌劑會使鱟試劑的蛋白失活,可對供試品進行稀釋降低干擾。

油脂類:脂類包裹內毒素,使內毒素無法暴露出來,實驗結果將出現(xiàn)假陰性,可通過添加分散劑(PBS50)的方式去除干擾。

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一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內為宜,pH值過高或過低,均可抑制鱟試劑與內毒素的反應, 使鱟試劑靈敏度下降??梢酝ㄟ^酸堿緩沖液(BH02)調節(jié)供試品的pH值,使其處于最佳的pH范圍。

《中國藥典》規(guī)定鱟試驗反應溫度在37±1℃,凝膠法試驗需要注意溫育時間60±2min。溫度過低,凝膠化推遲,溫度過高則破壞鱟試劑,阻止凝膠反應;延長溫育時間, 則提高了鱟試劑的靈敏度,易出現(xiàn)假陽性。光度法、重組C因子熒光法、重組級聯(lián)試劑顯色法(RCR0428)需要注意檢測設備(鱟試驗微生物快速檢測系統(tǒng)ELx808IU-SN)溫控性能。

凝膠法試驗在溫育過程和取放安瓿時要小心避免振動造成假陰性。

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BET結果會受多種因素的干擾,造成結果異常。我們在實驗過程中,應按藥典規(guī)定的操作規(guī)程、實驗條件、廠家專業(yè)培訓指導,排除各種干擾因素,保證實驗結果準確可靠。

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更多詳情請聯(lián)系我司業(yè)務員了解,感謝閱讀。